Hücre Kültürü İçin Temel Koşullar
1. Uygun hücre kültürü ortamı
Uygun bir hücre kültürü ortamı, in vitro hücre büyümesi ve çoğalması için en önemli koşullardan biridir. Kültür ortamı sadece hücre beslenmesini ve hücre büyümesini ve çoğalmasını teşvik eden temel maddeleri sağlamakla kalmaz, aynı zamanda kültürlenmiş hücrelerin büyümesi ve çoğaltılması için bir yaşam ortamı sağlar.
2. Yüksek kaliteli serum
Şu anda, çoğu sentetik ortam, serum eklenmesini gerektirir. Serum, hücre büyümesi için gerekli olan çeşitli büyüme faktörlerini ve diğer besinleri içeren hücre kültürü ortamındaki en önemli bileşenlerden biridir.
3. Sabit hücre büyüme sıcaklığı
Kültürlenmiş hücrelerin güçlü büyümesini sürdürmek için sabit ve uygun bir sıcaklık olmalıdır.
4. Uygun gaz ortamı
Gaz, memeli hücrelerinin hayatta kalması için gerekli koşullardan biridir ve gerekli gazlar esas olarak oksijen ve karbondioksittir.
5. Hücre Kültürü Sıcaklığı
Kültürlenmiş hücrelerin güçlü büyümesini sürdürmek için sabit ve uygun bir sıcaklık olmalıdır. Farklı hücre türlerinin kültür sıcaklığı için farklı gereksinimleri vardır. İnsan hücre kültürü için standart sıcaklık 36,5 derece ± 0,5 derecedir. Bu sıcaklık aralığından sapma, hücrelerin normal metabolizmasını etkileyecek ve hatta ölecektir.
6. Uygun gaz ortamı
Gaz, memeli hücre kültürünün hayatta kalması için gerekli koşullardan biridir ve gerekli gazlar esas olarak oksijen ve karbondioksittir. Oksijen, trikarboksilik asit döngüsüne katılır, hücre büyümesi ve çoğalması için enerji üretir ve hücre büyümesi için gerekli çeşitli bileşenleri sentezler.
Hücre kültürünün ortak kontaminasyonu
1. Bakteriyel kontaminasyon
Bakteriyel kontaminasyon en yaygın olanıdır. İşlem biraz uygunsuz olduğunda, hücre kontaminasyonuna neden olur. Bakteriyel kontaminasyondan sonra, mikroskop altında incelendiğinde siyah ince kum şeritleri olarak görünecektir. Çubuk şeklinde vb. İkincisi, kültür ortamı sarı ve bulanık hale gelir ve petri kabında ince kum şeklindeki tortular açıkça görülebilir ve zaman zaman garip bir koku olur.
2. Mantar kontaminasyonu
Mantarla kontamine kültür solüsyonu açık ve şeffaftır, büyük bir bakteriyel enfeksiyon salgını gibi değildir, bu nedenle erken tespit etmek zordur. Bazen mikroskop altında bir filament gibi görünür, bazen bir mercan gibi görünür ve yavaş yavaş çok ince siyah bir filament büyür. Bu çok geç kalındığında hücrelerin kurtarılması zordur.
3. Küf kontaminasyonu
Mantar enfeksiyonlarıyla tutarlı olarak, kültür ortamı temiz olduğundan, mantar kontaminasyonunun erkenden, genellikle çok geç olduğunda saptanması zordur. Kültür ortamında yavaş yavaş pıhtılaşmış safsızlıklar ortaya çıktı ve mikroskop altında rüzgardaki kedicikler gibi ipliksi kütleli yüzen nesneler görülebilir. Hücreler hala büyüyebilir, ancak zamanla hücreler bozulur ve büyümeyi durdurur.
4. Mikoplazma enfeksiyonu
Kültür ortamı bulanık hale gelir. Mikoplazma hücreleri enfekte ettikten sonra sitopatik değişiklikler belirgin değildir, ancak hücre durumu daha da kötüleşir ve büyüme yavaşlar. Mikroskop altında küçük siyah noktalar olabilir, ancak kültür ortamı genellikle bulanık değildir. Hücreler pasajlandıktan sonra hücreler arası siyah noktalar belirdi, hücreler vakuollendi ve birçok hücre apoptoz ve nekroza benziyordu. Sonunda hücreler yüzdü ve tamamen öldü.
Hücre kontaminasyonunu önleme
İyi kurallar ve düzenlemeler oluşturmak, hücre kontaminasyonunu azaltmada uzun bir yol kat edebilir. Erişim sistemi, çalışma normları ve günlük yönetim sistemi dahil.
Erişim sistemi: personel ve malzemeler dahil. Personelin kendi kendine ameliyat yapabilmesi için eğitim alması ve laboratuvara girmeden önce beyaz önlük, izolasyon önlüğü, maske, eldiven vb. giyim gerekliliklerini karşılaması gerekmektedir. İhtiyaç duyulan malzemeler için tek kullanımlık olmayan malzemeler kesinlikle kullanılmamalıdır. sterilize ve sterilize edilmiş ve satın alınan ürünlerin düzenli ve güvenilir kanallardan satın alınması gerekir. Yeni satın alınan hücreler kullanımdan önce test edilmeli ve doğrulanmalıdır.
Çalışma özellikleri: Rutin operasyonlar için spesifikasyonları formüle etmek en iyisidir ve laboratuar personeli, isteyerek değiştirilemeyecek olan çalıştırma spesifikasyonlarını takip etmeli ve ayrıca laboratuar personeli için iyi çalışma alışkanlıkları geliştirmelidir. Örneğin pipet ucu emildikten sonra ikinci kez ortama uzatılmaz ve bir kez yeterli miktarda ortam emilir. Sıvı eklerken, sıvı, mikoplazma kontaminasyonunu ve hücre çapraz kontaminasyonunu etkili bir şekilde önleyebilen süspansiyona mümkün olduğunca eklenmelidir. Ek olarak, mümkünse, bir seferde yalnızca bir hücre hattı çalıştırın ve çapraz kontaminasyonu önlemek için hücreler arasında kısa bir zaman aralığı olması daha iyidir.
Günlük yönetim sistemi: Çevrenin ve sarf malzemelerinin, reaktiflerin vb. kullanımı, temizliği ve bakımı için kural ve yöntemleri içerir. İki seviyeli envanter yönetimi de dahil olmak üzere reaktiflerin ve sarf malzemelerinin tüketim, envanter ve tedarik yönetimi de vardır. hücre örnekleri. Bulması kolay olmayan kontaminasyon kaynakları için, başta mikoplazma kontaminasyonu ve hücre çapraz kontaminasyonu olmak üzere düzenli testler yapmak en iyisidir.
BKMAM Bio, hücre kültürü için ilgili sarf malzemelerini sağlar:
Tek kullanımlık plastik yuvarlak/kare petri kapları:
Yüksek şeffaflıkta polistiren malzeme (PS);
Yüzey pürüzsüz ve düzdür ve mikroskop gözlemi altında hücrelerin optik bozulması yoktur;
İstifleme tasarımı, istiflemeyi ve depolamayı kolaylaştırır;
Etilen oksit sterilizasyonu (EO);
Aşınma ve korozyon direnci.
Hücre kültürü kaplarının yapışkan tedavisi:
Polistiren malzeme (PS);
Elektron ışını sterilizasyonu, pirojen yok, toksin yok;
Vakum plazma yüzey işlemi, mükemmel hücre yapışması;
Yüzey pürüzsüz ve düzdür ve mikroskop gözlemi altında hücrelerin optik bozulması yoktur;
İstiflenebilir tasarım, istiflemeyi ve depolamayı kolaylaştırır.
Plastik hücre kültürü plakaları:
Polistiren malzeme (PS);
Normal hücre kültürü için uygun, yapışmayan tedavi plakası tipi;
Pirojen yok, toksin yok, sterilize edilmiş;
Kolay gözyaşı tipi bağımsız ambalaj, kullanımı kolay;
Hücre kültürü plakalarının yapışkan tedavisi:
Polistiren malzeme (PS);
Yapışkan hücrelerin kültürü için uygun yapışkan tedavi (TC tedavisi) plaka tipi;
Pirojen yok, toksin yok, sterilize edilmiş;
Kolay gözyaşı tipi bağımsız ambalaj, kullanımı kolay;
Hepsi düz diplidir.
Hücre kültürü şişelerinin yapışkan tedavisi:
Polistiren malzeme (PS);
Elektron ışını sterilizasyonu, pirojen yok, toksin yok;
Vakum plazma yüzey işlemi, mükemmel hücre yapışması;
Gaz değişimine elverişli ve mikroorganizmaların geçmesini önleyen nefes alabilen örtü.
Dahili/harici spin kriyoviyaller:
yüzde 100 saf polipropilen malzeme (PP);
15psi, 121 derece sterilizasyona dayanabilir;
Tüp duvarı kalınlaştırılmış ve tüp gövdesi ölçek ve yazı alanına sahiptir;
Sızdırmazlığı sağlamak için boru kapağı dişi ile boru gövdesi arasında bir silikon halka conta vardır;
DNaz yok, RNaz yok, pirojen yok, endotoksin yok.
